2 × طاق پلاٹینم پی سی آر مکس۔
سرگرمی کی تعریف
1 یونٹ (U) طاق پلاٹینم ڈی این اے پولیمریز سرگرمی کو اینزائم کی مقدار سے تعبیر کیا جاتا ہے جس میں 10 این ایم ایل ڈو آکسی نیوکلیوٹائڈس کو ایسڈ میں گھلنشیل مادوں میں 74 ° C پر 30 منٹ کے اندر چالو سالمن سپرم ڈی این اے کو بطور ٹیمپلیٹ/پرائمر استعمال کرنے کی ضرورت ہوتی ہے۔
کوالٹی کنٹرول
SDS-PAGE کا پتہ لگانے سے پاکیزگی 99٪ سے زیادہ ہے۔ خارجی نیوکلیز کی کوئی سرگرمی نہیں پائی جاتی انسانی جینوم میں سنگل کاپی جین کو مؤثر طریقے سے بڑھایا جا سکتا ہے۔ کمرے کے درجہ حرارت پر ایک ہفتے کے لیے ذخیرہ کرنے پر کوئی خاص سرگرمی نہیں ہوتی۔
اہم تکنیکی پیرامیٹرز
اس میں 5′-3 ′ exonuclease سرگرمی اور 3′-5 ′ exonuclease سرگرمی ہے ، اور اس کی وفاداری Pfu پولیمریز کے ساتھ ہے۔ تق پلاٹینم پولیمریز کی توسیع کی رفتار پی ایف یو پولیمریز سے تیز ہے اور پرورش کی کارکردگی زیادہ ہے۔ پی سی آر پروڈکٹس کو براہ راست دو ٹوک سرے پر لگایا جا سکتا ہے یا ٹی اے ویکٹر سے کلون کیا جا سکتا ہے۔ اگر کلوننگ کی کارکردگی کو بہتر بنانے کی ضرورت ہے تو ، تجویز کی جاتی ہے کہ پہلے TA ویکٹر میں کلوننگ سے پہلے پاک کریں اور 3'-dA اوور ہینگ شامل کریں۔
ون ٹیوب طاق پلاٹینم ماسٹر مکس (نیشنل ہائی ٹیک پروڈکٹ سرٹیفیکیشن)
q طاق پلاٹینم ماسٹر مکس نے پی سی آر رد عمل کی خاصیت اور حساسیت کو بہتر بنایا ہے اور اعلی جی سی مواد ، ثانوی ڈھانچے اور اس طرح کے پیچیدہ سانچوں کو بڑھا سکتا ہے۔ زیادہ درست تجرباتی نتائج کو یقینی بناتے ہوئے ٹارگٹ ٹیمپلیٹ کی کم سے کم 2 کاپیاں بڑھائی جا سکتی ہیں۔
Ta منفرد طاق پلاٹینم ماسٹر مکس فارمولا پورے رد عمل کے نظام کو بہت مستحکم بناتا ہے ، اور سرگرمی 4. C پر بار بار جمنے یا طویل مدتی ذخیرہ کرنے سے متاثر نہیں ہوگی۔
PC مستحکم اور موثر پہلے سے تیار شدہ پی سی آر مخلوط حل آپریشن کو تیز اور آسان بنا سکتا ہے ، محنت کی شدت اور نمونے لینے کی غلطی کو بہت کم کرتا ہے۔ ہائی پرفارمنس پی سی آر بڑھانے والا اور آپٹیمائزر بھی مکس میں شامل ہے ، جو پی سی آر کے حالات پر ضروریات کو کم کرتا ہے۔
product اس پروڈکٹ میں ڈائی پر مشتمل اور ڈائی فری سسٹم دونوں ہیں۔ ڈائی پر مشتمل ماسٹر مکس مصنوعات کو پی سی آر کے بعد براہ راست الیکٹروفورس کیا جاسکتا ہے ، بغیر لوڈنگ بفر کو شامل کیے۔
درخواستیں۔
یہ پی ایف یو پولیمریز کی جگہ لے سکتا ہے تاکہ جینوم جیسے پیچیدہ ٹیمپلیٹس سے اعلی وفاداری کی مصنوعات کو بڑھایا جا سکے ، اور یہ ایپلی کیشنز کے لیے موزوں ہے جیسے اظہار جینوں کی کلوننگ ، سائٹ مخصوص تغیرات اور سنگل نیوکلیوٹائڈ پولیمورفزم (ایس این پی) وغیرہ کا تجزیہ۔
پی سی آر پرائمر ڈیزائن کرنے میں احتیاطی تدابیر:
پرائمر کی لمبائی عام طور پر 20-25 میل ہوتی ہے۔ تاہم ، جب لمبے ٹکڑے پی سی آر کرتے ہیں تو ، پرائمر کی لمبائی کو 30-35 میئر تک بڑھایا جانا چاہئے۔
pri دو پرائمر کے درمیان کوئی تکمیلی جوڑی نہیں ہے ، خاص طور پر 3. کے آخر میں آخری 3 اڈوں کے لیے۔
C GC مواد 50-60٪ ہونا چاہیے ، اور مقامی امیر GC یا AT سے پرہیز کریں۔ پرائمر اور ٹیمپلیٹ کو مضبوطی سے جوڑنے کے لیے ، 3. اختتام پر اے ٹی امیر ڈھانچے سے بچیں۔
ثانوی ڈھانچہ بنانے کے لیے پرائمر سے پرہیز کریں۔
two ایک دوسرے کے قریب ٹی ایم درجہ حرارت والے دو پرائمر منتخب کریں۔
پی سی آر کے لیے پرائمر کی ٹی ایم ویلیو کا حساب:
■ جب پرائمر 20 مر سے کم ہو: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C)۔
■ جب پرائمر 20 مر سے زیادہ ہو: Tm = 81.5+0.41 G (GC٪)-600/L ، جہاں L پرائمر کی لمبائی ہے۔
ne اینیلنگ درجہ حرارت (Tm-5) ■ C پر سیٹ کریں۔
پی سی آر پرائمر ان پٹ۔
پرائمر کی مناسب حتمی حراستی 0.1 μM اور 1.0 μM کے درمیان منتخب کی جاسکتی ہے۔ بہت کم پرائمر حراستی امپلیفیکیشن مصنوعات کی کم پیداوار کا باعث بنتی ہے ، جبکہ بہت زیادہ پرائمر حراستی غیر مخصوص پرورش کا زیادہ شکار ہوتی ہے۔ عام طور پر ، جب ٹیمپلیٹ ڈی این اے کی مقدار بڑی یا پیچیدہ ٹیمپلیٹ ڈی این اے (جیسے انسانی جینوم ڈی این اے) کو ٹیمپلیٹ کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے تو ، پرائمر کی حراستی کم ہونی چاہیے۔ جب ٹیمپلیٹ ڈی این اے کی مقدار چھوٹی ہو یا سادہ ٹیمپلیٹ ڈی این اے (مثلا pla پلازمیڈ ڈی این اے وغیرہ) بطور ٹیمپلیٹ استعمال کیا جائے تو پرائمر کی حراستی زیادہ ہونی چاہیے۔
تمام مصنوعات ODM/OEM کے لیے اپنی مرضی کے مطابق کی جا سکتی ہیں۔ تفصیلات کے لیے ،اپنی مرضی کے مطابق سروس (ODM/OEM) پر کلک کریں
  |
1 kb ٹکڑے کو بڑھانے کے لیے جینومک ڈی این اے کو بطور ٹیمپلیٹ استعمال کریں۔ |
A-1 سانچہ۔
■ ٹیمپلیٹ میں پروٹین کی نجاست یا طاق روکنے والے وغیرہ شامل ہیں DNA ڈی این اے ٹیمپلیٹ کو صاف کریں ، پروٹین کی نجاست کو ہٹا دیں یا پییفوریشن کٹس کے ساتھ ٹیمپلیٹ ڈی این اے نکالیں۔
template ٹیمپلیٹ کی ڈینیٹریشن مکمل نہیں ہے den مناسب طریقے سے ڈینیٹریشن کے درجہ حرارت میں اضافہ کریں اور ڈینیٹریشن کا وقت طویل کریں۔
■ سانچہ تنزلی —— سانچے کو دوبارہ تیار کریں۔
A-2 پرائمر۔
pri پرائمر کا ناقص معیار e پرائمر کو دوبارہ ترکیب کریں۔
پرائمر ہراس متعدد منجمد اور پگھلنے سے بچیں یا طویل مدتی 4 ° C کرائیو محفوظ ہیں۔
pri پرائمر کا نامناسب ڈیزائن (مثال کے طور پر پرائمر کی لمبائی کافی نہیں ، ڈائمر پرائمر وغیرہ کے درمیان بنتا ہے) -دوبارہ ڈیزائن پرائمر (پرائمر ڈائمر اور سیکنڈری ڈھانچے کی تشکیل سے بچیں)
A-3 Mg2+۔توجہ مرکوز کرنا
■ ملی گرام2+۔ حراستی بہت کم ہے - خاص طور پر Mg میں اضافہ۔2+۔ حراستی: ایم جی کو بہتر بنائیں۔2+۔ زیادہ سے زیادہ Mg کا تعین کرنے کے لیے 0.5 ملی میٹر کے وقفہ کے ساتھ 1 ملی میٹر سے 3 ملی میٹر تک رد عمل کی ایک سیریز کے ذریعے حراستی2+۔ ہر سانچے اور پرائمر کے لیے حراستی۔
A-4 اینیلنگ درجہ حرارت۔
an اعلی اینیلنگ درجہ حرارت پرائمر اور ٹیمپلیٹ کے بائنڈنگ کو متاثر کرتا ہے۔ اینیلنگ درجہ حرارت کو کم کریں اور 2 ° C کے میلان کے ساتھ حالت کو بہتر بنائیں۔
A-5 توسیع کا وقت۔
extension مختصر توسیع کا وقت extension توسیع کے وقت میں اضافہ کریں۔
فینومینا: منفی نمونے ٹارگٹ سیونس بینڈ بھی دکھاتے ہیں۔
پی سی آر کی A-1 آلودگی۔
target ٹارگٹ تسلسل یا بڑھاوے کی مصنوعات کی کراس آلودگی fully احتیاط سے منفی نمونے میں ہدف کی ترتیب پر مشتمل نمونے کو پائپ نہ کریں یا انہیں سینٹرفیج ٹیوب سے باہر نہ پھینکیں۔ موجودہ نیوکلک ایسڈ کو ختم کرنے کے لیے ریجنٹس یا آلات کو آٹوکلیو کیا جانا چاہیے ، اور آلودگی کے وجود کا تعین منفی کنٹرول تجربات کے ذریعے کیا جانا چاہیے۔
ag ریجینٹ آلودگی li ریجنٹس کو ایکوئٹ کریں اور کم درجہ حرارت پر اسٹور کریں۔
A-2 اعظم۔r
■ ملی گرام2+۔ حراستی بہت کم ہے - خاص طور پر Mg میں اضافہ۔2+۔ حراستی: ایم جی کو بہتر بنائیں۔2+۔ زیادہ سے زیادہ Mg کا تعین کرنے کے لیے 0.5 ملی میٹر کے وقفہ کے ساتھ 1 ملی میٹر سے 3 ملی میٹر تک رد عمل کی ایک سیریز کے ذریعے حراستی2+۔ ہر سانچے اور پرائمر کے لیے حراستی۔
■ نامناسب پرائمر ڈیزائن ، اور ہدف کی ترتیب میں غیر ہدف ترتیب کے ساتھ ہم آہنگی ہے۔ پرائمر دوبارہ ڈیزائن کریں۔
فینومینا: پی سی آر پرورش بینڈ متوقع سائز سے متضاد ہیں ، بڑے یا چھوٹے ، یا بعض اوقات دونوں مخصوص امپلیفیکیشن بینڈ اور غیر مخصوص پرورش بینڈ ہوتے ہیں۔
A-1 پرائمر۔
pri غریب پرائمر کی خصوصیت
e دوبارہ ڈیزائن پرائمر۔
mer پرائمر حراستی بہت زیادہ ہے ro مناسب طریقے سے ڈینیٹریشن کے درجہ حرارت میں اضافہ کریں اور ڈینیٹریشن کا وقت طویل کریں۔
A-2 Mg2+۔ توجہ مرکوز کرنا
Mg ایم جی2+۔ حراستی بہت زیادہ ہے - Mg2+ حراستی کو خاص طور پر کم کریں: Mg کو بہتر بنائیں۔2+۔ زیادہ سے زیادہ Mg کا تعین کرنے کے لیے 0.5 ملی میٹر کے وقفہ کے ساتھ 1 ملی میٹر سے 3 ملی میٹر تک رد عمل کی ایک سیریز کے ذریعے حراستی2+۔ ہر سانچے اور پرائمر کے لیے حراستی۔
A-3 تھرماسٹیبل پولیمریز۔
en ضرورت سے زیادہ انزائم کی مقدار 0.5 0.5 U کے وقفوں سے مناسب طریقے سے انزائم کی مقدار کم کریں۔
A-4 اینیلنگ درجہ حرارت۔
ne اینیلنگ درجہ حرارت بہت کم ہے rop مناسب طریقے سے اینیلنگ درجہ حرارت میں اضافہ کریں یا دو مرحلے اینیلنگ کا طریقہ اختیار کریں
A-5 PCR سائیکل
PC بہت زیادہ پی سی آر سائیکل PC پی سی آر سائیکلوں کی تعداد کم کریں۔
A-1 پرائمر۔specific غریب خصوصیت the پرائمر کو دوبارہ ڈیزائن کریں ، پرائمر کی پوزیشن اور لمبائی کو تبدیل کریں تاکہ اس کی خاصیت میں اضافہ ہو۔ یا نیسٹڈ پی سی آر انجام دیں۔
A-2 سانچہ DNA۔
template ٹیمپلیٹ خالص نہیں ہے the ٹیمپلیٹ کو صاف کریں یا ڈی این اے کو پیوریفیکیشن کٹس سے نکالیں۔
A-3 Mg2+۔ توجہ مرکوز کرنا
ایم جی2+۔ حراستی بہت زیادہ ہے - Mg کو خاص طور پر کم کریں۔2+۔ حراستی: ایم جی کو بہتر بنائیں۔2+۔ زیادہ سے زیادہ Mg کا تعین کرنے کے لیے 0.5 ملی میٹر کے وقفہ کے ساتھ 1 ملی میٹر سے 3 ملی میٹر تک رد عمل کی ایک سیریز کے ذریعے حراستی2+۔ ہر سانچے اور پرائمر کے لیے حراستی۔
A-4 dNTP۔
- ڈی این ٹی پی کی حراستی بہت زیادہ ہے - ڈی این ٹی پی کی حراستی کو مناسب طریقے سے کم کریں۔
A-5 اینیلنگ درجہ حرارت۔
low بہت کم اینیلنگ درجہ حرارت rop مناسب طریقے سے اینیلنگ درجہ حرارت میں اضافہ کریں۔
A-6 سائیکل
many بہت زیادہ سائیکل cycle سائیکل نمبر کو بہتر بنائیں۔
پہلا قدم مناسب پولیمریز کا انتخاب کرنا ہے۔ 3'-5 'exonuclease سرگرمی کی کمی کی وجہ سے باقاعدہ Taq پولیمریز پروف ریڈنگ نہیں کر سکتا ، اور مماثلت ٹکڑوں کی توسیع کی کارکردگی کو بہت کم کر دے گی۔ لہذا ، باقاعدہ تق پولیمریز 5 kb سے بڑے ہدف کے ٹکڑوں کو مؤثر طریقے سے بڑھا نہیں سکتا۔ توق پولیمریز کو خصوصی ترمیم یا دیگر اعلی فڈیلٹی پولیمریز کے ساتھ منتخب کیا جانا چاہیے تاکہ توسیع کی کارکردگی کو بہتر بنایا جاسکے اور لمبے ٹکڑے کو بڑھانے کی ضروریات کو پورا کیا جاسکے۔ مزید برآں ، لمبے ٹکڑوں کو بڑھانے کے لیے پرائمر ڈیزائن ، ڈینیٹریشن ٹائم ، ایکسٹینشن ٹائم ، بفر پی ایچ وغیرہ کے متعلقہ ایڈجسٹمنٹ کی بھی ضرورت ہوتی ہے۔ ٹیمپلیٹ کو پہنچنے والے نقصان کو روکنے کے لیے ، 94 ° C پر ڈینیٹریشن کا وقت 30 سیکنڈ یا اس سے کم فی سائیکل ہونا چاہیے ، اور درجہ حرارت 94 ° C تک بڑھانے کا وقت 1 منٹ سے کم ہونا چاہیے۔ مزید برآں ، توسیع کا درجہ حرارت تقریبا 68 68 ° C پر رکھنا اور 1 kb/min کی شرح کے مطابق توسیع کا وقت ڈیزائن کرنا لمبے ٹکڑوں کی موثر توسیع کو یقینی بنا سکتا ہے۔
اعلی خلوص کے ساتھ مختلف ڈی این اے پولیمریز کا استعمال کرکے پی سی آر پرورش کی غلطی کی شرح کو کم کیا جاسکتا ہے۔ اب تک پائے جانے والے تمام طاق ڈی این اے پولیمریز میں ، پی ایف یو انزائم میں سب سے کم خرابی کی شرح اور سب سے زیادہ وفاداری ہے (منسلک ٹیبل دیکھیں)۔ انزائم سلیکشن کے علاوہ ، محققین رد عمل کے حالات کو بہتر بنا کر پی سی آر اتپریورتن کی شرح کو مزید کم کرسکتے ہیں ، بشمول بفر کمپوزیشن ، تھرماسٹیبل پولیمریز کی حراستی اور پی سی آر سائیکل نمبر کو بہتر بنانا۔
مصنوعات کے زمرے۔
ہمیں کیوں منتخب کریں۔
اس کے قیام کے بعد سے ، ہماری فیکٹری اصول کی پاسداری کے ساتھ پہلی عالمی معیار کی مصنوعات تیار کر رہی ہے۔
پہلے معیار کا ہماری مصنوعات نے انڈسٹری میں بہترین ساکھ حاصل کی ہے اور نئے اور پرانے صارفین کے درمیان قیمتی اعتماد۔
- ٹیلی فون: +86 010-59822688۔
- بلڈنگ 5 ، نمبر 86 ، شوانگنگ ویسٹ روڈ ، ضلع چانگپنگ ، بیجنگ۔
- people@tiangen.com
