ہائی ڈی این سیکیور پلانٹ کٹ۔

A-1 ابتدائی نمونے میں خلیات یا وائرس کی کم حراستی cells خلیوں یا وائرس کی حراستی کو تقویت بخشتا ہے۔

A-2 نمونوں کی ناکافی lysis-نمونوں کو lysis بفر کے ساتھ اچھی طرح نہیں ملایا گیا ہے۔ یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ نبض کے ذریعے 1-2 بار اچھی طرح مکس کریں۔ protein ناکافی سیل lysis پروٹینیس K کی سرگرمی میں کمی کی وجہ سے۔ یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ ٹشو کو چھوٹے ٹکڑوں میں کاٹ دیں اور غسل کا وقت بڑھا دیں تاکہ لیسیٹ میں موجود باقیات کو ہٹایا جا سکے۔

A-3 ناکافی DNA جذب۔ لائسیٹ کو اسپن کالم میں منتقل کرنے سے پہلے 100٪ ایتھنول کے بجائے کوئی ایتھنول یا کم فیصد شامل نہیں کیا گیا۔

A-4 ایلیوشن بفر کی pH ویلیو بہت کم ہے۔ پی ایچ کو 8.0-8.3 کے درمیان ایڈجسٹ کریں۔

eluent میں بقیہ ایتھنول۔

eluent میں بقایا دھونے والا بفر PW ہے۔ ایتھنول کو اسپن کالم کو 3-5 منٹ کے لیے سینٹرفیوگ کرکے اور پھر کمرے کے درجہ حرارت پر یا 50 ℃ انکیوبیٹر پر 1-2 منٹ کے لیے ہٹایا جاسکتا ہے۔

A-1 نمونہ تازہ نہیں ہے۔ sample ایک مثبت نمونہ ڈی این اے کو بطور کنٹرول نکالیں تاکہ اس بات کا تعین کیا جا سکے کہ نمونے میں ڈی این اے خراب ہو گیا ہے۔

A-2 نامناسب پری ٹریٹمنٹ۔ excessive ضرورت سے زیادہ مائع نائٹروجن پیسنے ، نمی دوبارہ حاصل کرنے ، یا نمونے کی بہت زیادہ مقدار کی وجہ سے۔

pretreatments مختلف نمونوں کے لیے مختلف ہونا چاہیے۔ پودوں کے نمونوں کے لیے ، مائع نائٹروجن میں اچھی طرح پیسنا یقینی بنائیں۔ جانوروں کے نمونوں کے لیے ، مائع نائٹروجن میں homogenate یا اچھی طرح پیس لیں۔ سیل دیواروں والے نمونوں کے لیے جو ٹوٹنا مشکل ہے ، جیسے جی+ بیکٹیریا اور خمیر ، یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ سیل دیواروں کو توڑنے کے لیے لائسوزائم ، لائٹیکیس یا میکانیکل طریقے استعمال کیے جائیں۔

4992201/4992202 پلانٹ جینومک ڈی این اے کٹ ایک کالم پر مبنی طریقہ اختیار کرتی ہے جس کو نکالنے کے لیے کلوروفارم کی ضرورت ہوتی ہے۔ یہ خاص طور پر مختلف پودوں کے نمونوں کے ساتھ ساتھ پودوں کے خشک پاؤڈر کے لیے موزوں ہے۔ ہائی ڈی این اے سیکیور پلانٹ کٹ بھی کالم پر مبنی ہے ، لیکن فینول/کلوروفارم نکالنے کی ضرورت کے بغیر ، اسے محفوظ اور غیر زہریلا بنا دیتا ہے۔ یہ پودوں کے لیے موزوں ہے جس میں اعلی پولیساکرائڈز اور پولی فینول مواد ہے۔ 4992709/4992710 ڈی این اے کوئک پلانٹ سسٹم مائع پر مبنی طریقہ اختیار کرتا ہے۔ فینول/کلوروفارم نکالنے کی بھی ضرورت نہیں ہے۔ طہارت کا طریقہ کار سادہ اور تیز ہے جس میں نمونے کی ابتدائی مقدار کی کوئی حد نہیں ہے ، لہذا صارف تجرباتی ضروریات کے مطابق رقم کو لچکدار طریقے سے ایڈجسٹ کرسکتے ہیں۔ جی ڈی این اے کے بڑے ٹکڑوں کو زیادہ پیداوار کے ساتھ حاصل کیا جا سکتا ہے۔

جینومک ڈی این اے TIANamp بلڈ ڈی این اے کٹ کے ذریعے انسانی پورے خون کے نمونوں کی مختلف مقداروں سے نکالا گیا تھا۔ نتائج درج ذیل ہیں۔ نتائج صرف حوالہ کے طور پر درج ہیں ، اصل نکالنے کے نتائج نمونوں کی شرائط پر منحصر ہیں۔

خون کے جمنے والے ڈی این اے نکالنے کو ان دو کٹس میں فراہم کردہ ری ایجنٹس کا استعمال کرتے ہوئے پروٹوکول کو صرف خون کے جمنے والے ڈی این اے نکالنے کی مخصوص ہدایات میں تبدیل کرکے انجام دیا جاسکتا ہے۔ بلڈ کلٹ ڈی این اے نکالنے کے پروٹوکول کی سافٹ کاپی درخواست کرنے پر جاری کی جا سکتی ہے۔

تازہ نمونہ 1 ملی لیٹر پی بی ایس ، نارمل نمکین یا ٹی ای بفر کے ساتھ معطل کریں۔ ایک ہوموگانائزر کے ذریعے نمونے کو مکمل طور پر ہم آہنگ کریں اور سینٹرفیوگنگ کے ذریعے ایک ٹیوب کے نچلے حصے میں بارش جمع کریں۔ سپرنٹنٹ کو ٹھکانے لگائیں ، اور 200 μl بفر GA کے ساتھ بارش کو دوبارہ شروع کریں۔ مندرجہ ذیل ڈی این اے پیوریفیکیشن ہدایات کے مطابق کی جا سکتی ہے۔

پلازما ، سیرم اور جسمانی سیال کے نمونوں میں جی ڈی این اے کی صفائی کے لیے ، TIANamp مائیکرو ڈی این اے کٹ کی سفارش کی جاتی ہے۔ سیرم/پلازما کے نمونوں سے وائرس جی ڈی این اے کو پاک کرنے کے لیے ، TIANamp وائرس DNA/RNA Kit تجویز کیا جاتا ہے۔ سیرم اور پلازما کے نمونوں سے بیکٹیریل جی ڈی این اے کو پاک کرنے کے لیے ، TIANamp بیکٹیریا ڈی این اے کٹ تجویز کی جاتی ہے (مثبت بیکٹیریل کے لیے لائسوزائم شامل ہونا چاہیے)۔ تھوک کے نمونوں کے لیے ، ہائی سواب ڈی این اے کٹ اور TIANamp بیکٹیریا ڈی این اے کٹ کی سفارش کی جاتی ہے۔

فنگل جینوم نکالنے کے لیے ڈی این اے سیکیور پلانٹ کٹ یا ڈی این اے کوئک پلانٹ سسٹم کی سفارش کی جاتی ہے۔ خمیر جینوم نکالنے کے لئے ، TIANamp خمیر ڈی این اے کٹ کی سفارش کی جاتی ہے (لائٹیکیس خود تیار ہونا چاہئے)۔