ٹی گائیڈ سیل/ٹشو/پلانٹ آر این اے کٹ۔

A-1 سیل lysis یا homogenization کافی نہیں ہے۔

---- نمونے کے استعمال کو کم کریں ، lysis بفر کی مقدار میں اضافہ کریں ، homogenization اور lysis کے وقت میں اضافہ کریں۔

A-2 نمونہ کی رقم بہت بڑی ہے۔

---- استعمال شدہ نمونے کی مقدار کو کم کریں یا lysis بفر کی مقدار میں اضافہ کریں۔

A-1 ناکافی سیل lysis یا homogenization۔

---- نمونے کے استعمال کو کم کریں ، lysis بفر کی مقدار میں اضافہ کریں ، homogenization اور lysis کے وقت میں اضافہ کریں۔

A-2 نمونہ کی رقم بہت بڑی ہے۔

---- براہ کرم زیادہ سے زیادہ پروسیسنگ کی صلاحیت کا حوالہ دیں۔

A-3 RNA کو کالم سے مکمل طور پر الگ نہیں کیا گیا ہے۔

---- RNase فری پانی شامل کرنے کے بعد ، سینٹری فیوگ کرنے سے پہلے اسے چند منٹ کے لیے چھوڑ دیں۔

ایلونٹ میں A-4 ایتھنول۔

---- کللا کرنے کے بعد ، دوبارہ سینٹرفیوج کریں اور واشنگ بفر کو جتنا ممکن ہو ہٹا دیں۔

A-5 سیل کلچر میڈیم کو مکمل طور پر نہیں ہٹایا گیا ہے۔

---- سیل جمع کرتے وقت ، براہ کرم اس بات کو یقینی بنائیں کہ کلچر میڈیم کو جتنا ممکن ہو ہٹا دیں۔

A-6 RNAstore میں محفوظ خلیات مؤثر طریقے سے سینٹرفیوج نہیں ہوتے۔

---- RNAstore کثافت اوسط سیل کلچر میڈیم سے زیادہ ہے۔ اس لیے سینٹرفیوگل فورس میں اضافہ کیا جائے۔ یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ 3000x g پر سینٹرفیوج کریں۔

A-7 کم آر این اے مواد اور نمونے میں کثرت۔

---- ایک مثبت نمونہ استعمال کریں تاکہ یہ معلوم کیا جا سکے کہ کم پیداوار نمونے کی وجہ سے ہے۔

A-1 مواد تازہ نہیں ہے۔

---- تازہ ٹشوز کو فوری طور پر مائع نائٹروجن میں ذخیرہ کیا جانا چاہیے یا فوری طور پر آر این اے سٹور ریجنٹ میں ڈالنا چاہیے تاکہ نکالنے کے اثر کو یقینی بنایا جا سکے۔

A-2 نمونہ کی رقم بہت بڑی ہے۔

---- نمونے کی مقدار کم کریں۔

A-3 RNase آلودگی۔n

---- اگرچہ کٹ میں فراہم کردہ بفر RNase پر مشتمل نہیں ہے ، لیکن نکالنے کے عمل کے دوران RNase کو آلودہ کرنا آسان ہے اور اسے احتیاط سے سنبھالا جانا چاہیے۔

A-4 الیکٹروفورسس آلودگی۔

---- الیکٹروفورسس بفر کو تبدیل کریں اور یقینی بنائیں کہ استعمال کی چیزیں اور لوڈنگ بفر RNase آلودگی سے پاک ہیں۔

A-5 الیکٹروفورسس کے لیے بہت زیادہ لوڈنگ۔

---- نمونہ لوڈنگ کی مقدار کم کریں ، ہر کنویں کی لوڈنگ 2 μg سے زیادہ نہیں ہونی چاہیے۔

A-1 نمونہ کی رقم بہت بڑی ہے۔

---- نمونے کی مقدار کم کریں۔

A-2 کچھ نمونوں میں اعلی DNA مواد ہوتا ہے اور DNase سے علاج کیا جا سکتا ہے۔

---- RNase سے پاک DNase علاج کو حاصل شدہ RNA حل پر انجام دیں ، اور RNA علاج کے بعد کے تجربات کے لیے براہ راست استعمال کیا جا سکتا ہے ، یا RNA پیوریفیکیشن کٹس کے ذریعے مزید پاک کیا جا سکتا ہے۔

شیشے کے سامان کے لیے ، 150 ° C پر 4 گھنٹے کے لیے سینکا ہوا۔ پلاسٹک کنٹینرز کے لیے ، 0.5 M NaOH میں 10 منٹ کے لیے ڈبویا جاتا ہے ، پھر RNase فری پانی سے اچھی طرح دھویا جاتا ہے اور پھر RNase کو مکمل طور پر ہٹانے کے لیے جراثیم سے پاک کیا جاتا ہے۔ تجربے میں استعمال ہونے والے ری ایجنٹس یا حل ، خاص طور پر پانی ، RNase سے پاک ہونا چاہیے۔ تمام ریجینٹ تیاریوں کے لیے RNase فری پانی استعمال کریں (صاف شیشے کی بوتل میں پانی ڈالیں ، DEPC کو 0.1 of (V/V) کی حتمی حراستی میں شامل کریں ، راتوں رات ہلائیں اور آٹوکلیو کریں)۔