TIANSeq HiFi Amplification Mix

لائبریری پرورش پی سی آر پریمکس اعلی لائبریری پیداوار ، اعلی مخلص اور کم بیس تعصب کے ساتھ۔

TIANSeq HiFi Ampli ﬁation مکس ایک نیا اعلی مخلص PCR یمپلیفیکیشن پریمکس ہے ، جو کہ ہائی تھرو پٹ سیکوینسنگ لائبریری اور دیگر PCR سے متعلقہ کلوننگ اور ڈٹیکشن کے پی سی آر پرورش کے لیے موزوں ہے۔ پری مخلوط حل میں الٹرا ہائی فائی ڈی این اے پولیمریز ایک نئی قسم کا تیز اور اعلی مخلص ڈی این اے پولیمریز ہے جو ہدایت شدہ مالیکیولر ارتقاء ٹیکنالوجی کے ذریعہ تیار کیا گیا ہے ، جو ٹیمپلیٹس سے ڈی این اے پولیمریز کی وابستگی کو بڑھاتا ہے۔ اس انزائم نے بڑھانے کی رفتار اور توسیع کی صلاحیت کو بہتر بنایا ہے ، اور پی سی آر کی کامیابی کی شرح اور مصنوعات کی پیداوار میں اضافہ ہوا ہے۔ انزائم میں بہترین 3′5 ′ ایکونکلیز سرگرمی (پروف ریڈنگ ایکٹیویٹی) بھی ہوتی ہے ، اور اس کی وفاداری مارکیٹ میں مین اسٹریم پروڈکٹس کی سطح تک پہنچ سکتی ہے ، جس میں جین اور لائبریری کو بڑھانے کے عمل میں صداقت کو یقینی بنایا جاتا ہے۔ اس کے علاوہ ، پروڈکٹ میں ڈی این اے پولیمریز کا ہاٹ اسٹارٹ فنکشن ہے ، جو کم درجہ حرارت کے تحت غیر مخصوص پرورش اور انزائم سرگرمی کے نقصان کو مؤثر طریقے سے کنٹرول کرسکتا ہے ، اس طرح پی سی آر پرورش کی مخصوصیت اور استحکام کو یقینی بناتا ہے۔ ایک پی سی آر رد عمل بڑھانے کا نظام بھی مکس میں مربوط ہے ، جو نہ صرف مکس کے استحکام کو بہتر بناتا ہے ، پی سی آر رد عمل روکنے والوں میں پولیمریز کی رواداری کو بڑھاتا ہے ، بلکہ الٹرا ہائی فائی ڈی این اے پولیمریز کی مختلف جی سی مواد کے ساتھ ٹیمپلیٹس میں موافقت کو بھی بہتر بناتا ہے۔ کہ پروڈکٹ میں وسیع نمونہ آفاقی اور نمونہ ان پٹ رینج ہے ، اور پی سی آر رد عمل کی بنیادی ترجیح کو کم کرتا ہے۔

کیٹ. نہیں	پیکنگ سائز
4992369	1 ملی
4992370	5 × 1 ملی لیٹر
4992371	5*1 ملی لیٹر
4992372	5*1 ملی لیٹر

ہمیں ای میل بھیجیں۔

مصنوعات کی تفصیل

تجرباتی مثال۔

عمومی سوالات

پروڈکٹ ٹیگز۔

بہاو

این جی ایس لائبریری پی سی آر پرورش ، پہلی نسل کی ترتیب پی سی آر پرورش ، اعلی مخلص کلوننگ ، ایس این پی کا پتہ لگانا ، سائٹ سے مخصوص تغیر وغیرہ۔

خصوصیات

-اعلی کارکردگی پرورش: تبادلوں کی شرح کو یقینی بنائیں اور پرورش کے چکروں کو کم کریں۔
■ کم ترجیح: مختلف GC٪ مواد والے ڈی این اے ٹیمپلیٹس کے لیے توازن بڑھانے کی کارکردگی۔
specific اعلی خصوصیت: ہاٹ اسٹارٹ پراپرٹی اور مضبوط خصوصیت کے ساتھ۔
■ اعلی مخلصی: مخلصی طاق ڈی این اے پولیمریز سے 50 گنا زیادہ ہے۔
sensitivity اعلی حساسیت: سانچے کا ان پٹ 1 pg تک کم ہوسکتا ہے۔

تمام مصنوعات ODM/OEM کے لیے اپنی مرضی کے مطابق کی جا سکتی ہیں۔ تفصیلات کے لیے ،اپنی مرضی کے مطابق سروس (ODM/OEM) پر کلک کریں

پچھلا: TIANSeq سنگل انڈیکس اڈاپٹر (Illumina)

اگلے: TIANSeq ٹکڑا/مرمت/ٹیلنگ ماڈیول۔

	چترا 1. لائبریری کی افزودگی جینومک ڈی این اے کی مختلف جی سی تناسب کے ساتھ 2100. نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ TIANSeq HiFi Amplification Mix میں لائبریری کی پیداوار زیادہ ہے ، مختلف GC مواد کے لیے ایک مضبوط آفاقی ، اور لائبریری کی افزودگی کی کارکردگی دیگر سپلائرز سے بہتر تھی۔
	اعداد و شمار کی ترتیبTIANSeq HiFi Amplification Mix اور HiFi انزائم کا استعمال کریں جو خاص طور پر سپلائر K اور N سے NGS لائبریری پرورش کے لیے استعمال کیا جاتا ہے اسی جینومک ڈی این اے کی لائبریری پرورش کے لیے (جینوم ان پٹ 10 ng ہے)۔ ترتیب کے بعد ، لائبریری کی کوریج اور نقل کی شرح کا تجزیہ کریں۔
جی سی کی ترجیح	شکل 2۔ سپلائر K اور N سے TIANSeq HiFi Amplification Mix اور HIFi کا استعمال کرتے ہوئے مختلف CG مواد کے ساتھ جینوم لائبریریوں کو وسعت دیں۔ نتیجہ یہ ظاہر کرتا ہے کہ TIANSeq HiFi Amplification Mix amplification لائبریری کی یکسانیت اچھی ہے اور GC کی ترجیح کے بغیر ، جو نتائج کے برابر ہے کمپنی K اور کمپنی N کی مصنوعات سے قدرے بہتر نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ TIANSeq HiFi امپلیفیکیشن مکس امپلیفیکیشن لائبریری کی کوریج زیادہ ہے ، نقل کی شرح ضروریات کو پورا کرتی ہے ، اور لائبریری کی پرورش کی کارکردگی حریفوں کے برابر ہے۔

سوال: این جی ایس لائبریری میں ٹکڑوں کے سائز کی عام تقسیم کیا ہے؟

اس وقت ، ہائی تھرو پٹ سیکوینسنگ ٹیکنالوجی بنیادی طور پر اگلی نسل کی سیکوینسنگ ٹیکنالوجی پر مبنی ہے۔ چونکہ اگلی نسل کی ترتیب کی ٹیکنالوجی کی پڑھنے کی لمبائی محدود ہے ، ہمیں مکمل لمبائی کی ترتیب کو چھوٹے ٹکڑوں کی لائبریریوں میں ترتیب سے توڑنا ہوگا۔ مختلف تسلسل کے تجربات کی ضروریات کے مطابق ، ہم عام طور پر سنگل اینڈ سیکوینسنگ یا ڈبل اینڈ سیکوینسنگ کا انتخاب کرتے ہیں۔ فی الحال اگلی نسل کی ترتیب لائبریری کے ڈی این اے کے ٹکڑے عام طور پر 200-800 بی پی کی حد میں تقسیم کیے جاتے ہیں۔

س: تعمیر شدہ لائبریری کا ڈی این اے حراستی کم ہے۔

a) ڈی این اے ناقص معیار کا ہے اور اس میں روکنے والے ہوتے ہیں۔ اینجائم کی سرگرمی کو روکنے سے بچنے کے لیے اعلی معیار کے ڈی این اے نمونے استعمال کریں۔

ب) ڈی این اے لائبریری کی تعمیر کے لیے پی سی آر فری طریقہ استعمال کرتے وقت ڈی این اے نمونے کی مقدار ناکافی ہے۔ جب ٹکڑے ہوئے ڈی این اے کا ان پٹ 50 این جی سے تجاوز کر جاتا ہے تو ، لائبریری کی تعمیر کے عمل کے دوران پی سی آر سے پاک کام کا بہاؤ انتخابی طور پر کیا جا سکتا ہے۔ اگر لائبریری کی کاپی نمبر براہ راست ترتیب دینے کے لیے بہت کم ہے تو ، ڈی این اے لائبریری کو پی سی آر کے ذریعے اڈاپٹر لیگیشن کے بعد بڑھایا جا سکتا ہے۔

ج) آر این اے آلودگی غلط ڈی این اے کی درست درستگی کا باعث بنتی ہے آر این اے آلودگی جینومک ڈی این اے کی صفائی کے عمل میں موجود ہوسکتی ہے ، جس کی وجہ سے لائبریری کی تعمیر کے دوران ڈی این اے کی غلط مقدار اور ناکافی ڈی این اے لوڈنگ ہوسکتی ہے۔ RNase کو RNase سے علاج کر کے ہٹایا جا سکتا ہے۔

س: ڈی این اے لائبریری نے الیکٹروفورسس تجزیہ میں غیر معمولی بینڈ دکھائے۔

A-1۔

چھوٹے ٹکڑے (60 bp-120 bp) ظاہر ہوتے ہیں Agencourt AMPure XP مقناطیسی موتیوں کے ساتھ طہارت ان اڈاپٹر کے ٹکڑوں کو مؤثر طریقے سے ہٹا سکتی ہے اور تسلسل کے معیار کو یقینی بناتی ہے۔

ب) پی سی آر پرورش کے بعد لائبریری میں بڑے ٹکڑے نمودار ہوتے ہیں اڈاپٹر لگنے کے بعد لائبریری ڈی این اے کے ٹکڑے کا سائز 120 بی پی بڑھ جائے گا۔ اگر اڈاپٹر لیگیشن کے بعد ڈی این اے کا ٹکڑا 120 بی پی سے زیادہ بڑھ جاتا ہے تو ، یہ پی سی آر کی اضافی مقدار کے غیر معمولی ٹکڑے پرور کی وجہ سے ہوسکتا ہے۔ پی سی آر سائیکلوں کی تعداد کو کم کرنا صورتحال کو روک سکتا ہے۔

اڈاپٹر لیگیشن کے بعد لائبریری ڈی این اے کے ٹکڑوں کا غیر معمولی سائز اس کٹ میں اڈاپٹر کی لمبائی 60 بی پی ہے۔ جب ٹکڑے کے دونوں سروں کو اڈاپٹر سے جوڑ دیا جائے تو لمبائی صرف 120 بی پی بڑھ جائے گی۔ جب اس کٹ کے ذریعہ فراہم کردہ کے علاوہ کوئی اڈاپٹر استعمال کریں تو براہ کرم متعلقہ معلومات جیسے اڈاپٹر کی لمبائی فراہم کرنے کے لیے سپلائر سے رابطہ کریں۔ براہ کرم اس بات کو یقینی بنائیں کہ تجرباتی کام کا بہاؤ اور آپریشن دستی میں بیان کردہ مراحل پر عمل کریں۔

ڈی) اڈاپٹر لیگیشن سے پہلے ڈی این اے کا غیر معمولی سائز مختلف ڈی این اے ان پٹ کے لیے مختلف رد عمل کے اوقات استعمال کیے جانے چاہئیں۔ اگر ڈی این اے ان پٹ 10 این جی سے زیادہ ہے تو ، ہم تجویز کرتے ہیں کہ 12 منٹ کا رد عمل کا وقت آپٹمائزیشن کے آغاز کے وقت کے طور پر منتخب کریں ، اور اس وقت پیدا ہونے والے ٹکڑے کا سائز بنیادی طور پر 300-500 بی پی کی حد میں ہے۔ صارفین ڈی این اے کے ٹکڑوں کی لمبائی کو اپنی ضروریات کے مطابق 2-4 منٹ تک بڑھا یا کم کر سکتے ہیں تاکہ مطلوبہ سائز کے ساتھ ڈی این اے کے ٹکڑوں کو بہتر بنایا جا سکے۔

A-2۔

ا) ٹکڑے ہونے کا وقت بہتر نہیں ہے اگر ٹکڑے ٹکڑے شدہ ڈی این اے بہت چھوٹا یا بہت بڑا ہے تو ، براہ کرم رد عمل کے وقت کا تعین کرنے کے لئے ہدایات میں فراہم کردہ فریمگمنٹ ٹائم سلیکشن کے رہنما خطوط سے رجوع کریں ، اور اس ٹائم پوائنٹ کو بطور کنٹرول استعمال کریں ، اس کے علاوہ ایک سیٹ اپ کریں ٹکڑے کرنے کے وقت زیادہ درست ایڈجسٹمنٹ کرنے کے لیے رد عمل کا نظام 3 منٹ کو طول یا مختصر کرنا۔

A-3۔

ٹکڑوں کے علاج کے بعد ڈی این اے کی غیر معمولی سائز کی تقسیم۔

a) فریگمنٹیشن ریجینٹ کا غلط پگھلنے کا طریقہ ، یا ریگینٹ پگھلنے کے بعد مکمل طور پر مکس نہیں ہوتا ہے۔ برف پر 5 × فریگمنٹیشن انزائم مکس ریجنٹ پگھلائیں۔ ایک بار پگھلنے کے بعد ، ٹیوب کے نچلے حصے کو ہلکے سے ریجینٹ کو یکساں طور پر مکس کریں۔ ریجنٹ کو بھنور نہ بنائیں!

ب) ڈی این اے ان پٹ کے نمونے میں EDTA یا دیگر آلودگی شامل ہیں نمک آئنوں کی کمی اور ڈی این اے صاف کرنے کے مرحلے میں چیلاٹنگ ایجنٹ تجربے کی کامیابی کے لیے خاص طور پر اہم ہیں۔ اگر ڈی این اے 1 × TE میں تحلیل ہو جائے تو ، ہدایات میں فراہم کردہ طریقہ استعمال کریں تاکہ ٹکڑے ٹکڑے ہو جائیں۔ اگر حل میں ای ڈی ٹی اے کی حراستی غیر یقینی ہے ، تو یہ سفارش کی جاتی ہے کہ ڈی این اے کو پاک کریں اور اسے بعد کے رد عمل کے لیے ڈیونائزڈ پانی میں تحلیل کریں۔

ج) غلط ابتدائی ڈی این اے کی مقدار ٹکڑے کرنے کے علاج سے پہلے ، رد عمل کے نظام میں ڈی این اے کی صحیح مقدار کا تعین کرنے کے لیے کیوبٹ ، پیکوگرین اور دیگر طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے ڈی این اے کی درست مقدار ضروری ہے۔

د) رد عمل کے نظام کی تیاری ہدایات پر عمل نہیں کرتی ہے بہترین اثر کو یقینی بنانے کے لیے تمام رد عمل کے اجزاء برف پر رکھے جائیں اور رد عمل کے نظام کی تیاری مکمل ٹھنڈک کے بعد کی جائے۔ تیاری مکمل ہونے کے بعد ، براہ کرم اچھی طرح مکس کرنے کے لیے فلک یا پائپیٹ۔ بھنور نہ بنو!

سوال: TIANSeq DirectFast DNA Library Kit (Illumina) کے لیے اہم نوٹس (4992259/4992260)

1. اختلاط کا غلط طریقہ (بھنور ، پرتشدد دوڑ ، وغیرہ) لائبریری کے ٹکڑوں کی غیر معمولی تقسیم کا سبب بنے گا (جیسا کہ مندرجہ ذیل تصویر میں دکھایا گیا ہے) ، اس طرح لائبریری کا معیار متاثر ہوگا۔ لہذا ، جب فریگمنٹیشن مکس ری ایکشن سلوشن تیار کرتے ہو تو ، براہ کرم مکس کرنے کے لیے اوپر اور نیچے آہستہ سے پائپیٹ کریں ، یا فنگر ٹپ استعمال کریں اور یکساں طور پر مکس کریں۔ محتاط رہیں کہ بھنور کے ساتھ نہ ملیں۔

2. لائبریری کی تعمیر کے لیے اعلی پاکیزگی کا ڈی این اے استعمال کرنا ضروری ہے۔

DNA اچھی ڈی این اے سالمیت: الیکٹروفورسس بینڈ 30 کلو سے زیادہ ہے ، بغیر ٹیلنگ کے۔

■ OD260/230:> 1.5۔

■ OD260/280: 1.7-1.9۔

3. ڈی این اے ان پٹ کی مقدار درست ہونی چاہیے۔

4. ڈی این اے حل میں ای ڈی ٹی اے کے مواد کا تعین ہونا ضروری ہے ای ڈی ٹی اے کا ٹکڑے ٹکڑے کرنے کے رد عمل پر بہت اثر ہے۔ اگر ای ڈی ٹی اے کا مواد زیادہ ہے تو ، بعد کے ٹیسٹ سے پہلے ڈی این اے صاف کرنے کی ضرورت ہے۔

5. ٹکڑے کرنے کے رد عمل کا حل برف پر تیار ہونا ضروری ہے رد عمل کے وقت کی درستگی کو یقینی بنانے کے لیے ، براہ کرم برف پر رد عمل کا نظام تیار کریں۔

6. ٹکڑے کرنے کے رد عمل کا وقت درست ہونا ضروری ہے

سوال: TIANSeq Fast RNA لائبریری کٹ (Illumina) کے لیے اہم نوٹس (4992375/4992376)

1. اس کٹ پر کس قسم کا نمونہ لاگو ہوتا ہے؟

اس کٹ کا قابل اطلاق نمونہ کل آر این اے یا اچھی آر این اے سالمیت کے ساتھ پاک ایم آر این اے ہو سکتا ہے۔ اگر کل آر این اے لائبریری کی تعمیر کے لیے استعمال کیا جاتا ہے تو پہلے آر آر این اے کو ہٹانے کے لیے آر آر این اے ختم کرنے والی کٹ (بلی#4992363/4992364/4992391) استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔

2. کیا FFPE کے نمونے اس کٹ سے لائبریری بنانے کے لیے استعمال کیے جا سکتے ہیں؟

ایف ایف پی ای نمونوں میں ایم آر این اے کو ایک خاص حد تک کم کیا جائے گا ، نسبتا poor ناقص سالمیت کے ساتھ۔ لائبریری کی تعمیر کے لیے اس کٹ کو استعمال کرتے وقت ، یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ وہ ٹکڑے کرنے کے وقت کو بہتر بنائیں (ٹکڑے کرنے کا وقت کم کریں یا تقسیم نہ کریں)۔

3. پروڈکٹ دستی میں فراہم کردہ سائز کے انتخاب کے مرحلے کا استعمال کرتے ہوئے ، داخل کردہ طبقہ میں معمولی انحراف کی کیا وجہ ہوسکتی ہے؟

سائز کا انتخاب اس پروڈکٹ دستی میں سائز کے انتخاب کے مرحلے کے مطابق سختی سے کیا جائے گا۔ اگر کوئی انحراف ہے تو ، اس کی وجہ یہ ہو سکتی ہے کہ مقناطیسی موتیوں کو کمرے کے درجہ حرارت سے متوازن نہیں کیا جاتا ہے یا مکمل طور پر ملا نہیں جاتا ہے ، پائپ درست نہیں ہے یا مائع نوک میں رہتا ہے۔ تجربے کے لیے کم ادسورپشن کے ساتھ تجاویز استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔

4. لائبریری کی تعمیر میں اڈاپٹر کا انتخاب۔

لائبریری کی تعمیراتی کٹ میں اڈاپٹر ریجنٹ نہیں ہے ، اور اس کٹ کو TIANSeq Single-Index Adapter (Illumina) (4992641/4992642/4992378) کے ساتھ استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔

5. لائبریری کا QC۔

کتب خانے کی مقدار کا پتہ لگانا: Qubit اور qPCR کا استعمال بالترتیب بڑے پیمانے پر حراستی اور داڑھ کی حراستی کا تعین کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ آپریشن سختی سے مصنوعات کے دستی کے مطابق ہے۔ لائبریری کی حراستی عام طور پر این جی ایس کی ترتیب کی ضروریات کو پورا کرے گی۔ لائبریری کی تقسیم کی حد کا پتہ لگانا: لائبریری کی تقسیم کی حد کا پتہ لگانے کے لیے Agilent 2100 Bioanalyzer کا استعمال۔

6. پرورش سائیکل نمبر کا انتخاب۔

ہدایات کے مطابق ، پی سی آر سائیکلوں کی تعداد 6-12 ہے ، اور پی سی آر سائیکلوں کی تعداد نمونہ ان پٹ کے مطابق منتخب کی جانی چاہیے۔ اعلی پیداوار والی لائبریریوں میں ، عام طور پر مختلف ڈگریوں میں اضافہ ہوتا ہے ، جو ایجیلنٹ 2100 بائیو اینالائزر کی کھوج میں ٹارگٹ رینج کی چوٹی کے بعد قدرے بڑی چوٹی سے ظاہر ہوتا ہے ، یا کیوبٹ کی کھوج حراستی کیو پی سی آر سے کم ہوتی ہے۔ ہلکا پھلکا ہونا ایک عام رجحان ہے ، جو لائبریری کی ترتیب اور اس کے بعد کے ڈیٹا کے تجزیے کو متاثر نہیں کرتا ہے۔

7. اسپائیکس Agilent 2100 Bioanalyzer کے سراغ پروفائل میں ظاہر ہوتا ہے۔

Agilent 2100 Bioanalyzer detection میں سپائکس کی ظاہری شکل نمونوں کے ناہموار ٹکڑوں کی وجہ سے ہے ، جہاں مخصوص سائز میں زیادہ ٹکڑے ہوں گے ، اور یہ پی سی آر افزودگی کے بعد زیادہ واضح ہو جائے گا۔ اس صورت میں ، یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ سائز کا انتخاب نہ کریں ، یعنی 15 منٹ انکیوبیٹڈ کے لیے ٹکڑے ٹکڑے کی حالت 94 ° C پر رکھیں ، جہاں ٹکڑے کی تقسیم چھوٹی اور مرتکز ہے ، اور یکسانیت کو بہتر بنایا جا سکتا ہے۔

اپنا پیغام یہاں لکھیں اور ہمیں بھیجیں۔

مصنوعات کے زمرے۔

ہمیں کیوں منتخب کریں۔

اس کے قیام کے بعد سے ، ہماری فیکٹری اصول کی پاسداری کے ساتھ پہلی عالمی معیار کی مصنوعات تیار کر رہی ہے۔
پہلے معیار کا ہماری مصنوعات نے انڈسٹری میں بہترین ساکھ حاصل کی ہے اور نئے اور پرانے صارفین کے درمیان قیمتی اعتماد۔

پوچھ گچھ